استخراج، خالص?سازی و تعیین ویژگی?های بیوشیمیایی نوع جدیدی آنزیم آمیلاز از فلور میکروبی چشمه دیگ رستم

این کار گزارشی از جداسازی، خالص‏سازی و تعیین ویژگی‏های بیوشیمیایی آنزیم آلفا- آمیلاز اسیدوفیل جداشده از باکتری جدید ‏bacillus sp.dr90 موجود در فلور میکروبی چشمه آب‏گرم دیگ‏رستم است. ابتدا جداسازی، کشت باکتری و شناسایی نسبی جنس آن بر اساس روش‏های بیوشیمیایی و مولکولی انجام شد. سپس آنزیم تولید شده با استفاده از روش‏های رسوب‏دهی با سولفات آمونیوم، اولترافیلتراسیون و کروماتوگرافی تبادل یونی با رزین q- سفاروز، خالص شد. وزن مولکولی آنزیم بر اساس sds-page حدود 69 کیلو‏دالتون است. phبهینه آنزیم، 4 و آنزیم در phبین 3 تا 6 پایدار است؛ بنابراین می‏توان نتیجه گرفت که آنزیم یک آنزیم آمیلاز اسیدوفیل است. دمای بهینه آنزیم، ?c45 است. یون‏هایzn2+ و hg2+(1، 5 و 10 میلی مولار) اثر مهاری بر فعالیت آنزیم داشتند. یون‏های ba2+، mg2+و fe2+ (1، 5 و 10 میلی مولار) فعالیت آنزیم را افزایش دادند. همچنین یون‏های na+،k+ و ca2+ (1، 5 و 10 میلی مولار) تأثیری بر فعالیت آنزیم نداشتند.edta ، pmsfو? ـ مرکاپتواتانول (1، 5 و 10 میلی مولار) تاثیری بر فعالیت آنزیم نداشتند. مقاومت آنزیم به سورفاکتانت‏های tition x-100وsds (1، 5 و 10 میلی مولار) نسبتاً خوب است. برای سوبسترای نشاسته مقادیر سینتیکی km و vmaxبه ترتیب، 1- mg.ml4 و µm.min1-.mg1-33/333 است. آنالیز محصولات تولیدی آنزیم توسط روش کروماتوگرافی لایه نازک (tlc) نشان داد که محصول نهایی عمل آنزیم، گلوکز و مالتوز است. اثر چهار مایع یونی شامل 1- اتیل 3- متیل ایمیدازولیوم برماید، 1-بوتیل 3- متیل ایمیدازولیوم برماید، 1- هگزیل 3- متیل ایمیدازولیوم برماید و 1-بوتیل 3- متیل ایمیدازولیوم کلراید، بر روی فعالیت آنزیم آمیلاز نشان داد که این مایعات سبب کاهش فعالیت آنزیم ‏شدند. با توجه به این ویژگی‏ها، احتمال کاربرد آنزیم در صنایع نشاسته و شوینده‏ها وجود دارد.